二手高效液相色譜儀是通過將混合物的組分溶解、分配或吸附在固定相和流動相中的不同而使組分在相對運動過程中多次受到上述各力的作用，從而達到相互分離的目的。HPLC廣泛應用于食品分析，環境分析，生命科學，醫學檢驗，無機分析。一般情況下，80%-85%的有機物可以采用二手HPLC。
1、輸液系統
包括溶劑柜、真空脫氣機、溶劑混合器、高壓泵等，其中核心部分是泵；泵的作用提供足夠的驅動力使流動相通過填充緊密的色譜柱。
洗脫方式也分為兩種：
（1）等度洗脫：在同一分析周期內流動相組成保持恒定，適合于組分數目較少，性質差別不大的樣品。
（2）梯度洗脫：采用兩種（或多種）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續改變流動相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用于分析組分數目多、性質差異較大的復雜樣品。
2、進樣系統
把分析試樣有效地送入色譜柱進行分離。一般有自動進樣器和手動進樣器，進樣量應不小于定量環體積的5-10倍（最少3倍）。
3、分離系統
主要是色譜柱，色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等，其尺寸（內徑、長短）不盡相同；色譜柱填料主要有硅膠基質和聚合物基質，填料的粒徑不盡相同。
4、檢測器
對檢測器的要求：靈敏度高、重現性好、線性范圍寬、死體積小、對溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器等。
